Indirekt ELISA módszer kidolgozása sertés akut hasmenés szindróma koronavírus IgG antitestének kimutatására rekombináns tüskeprotein alapján

A sertés akut hasmenés szindróma koronavírusa (SADS-CoV) egy újonnan felfedezett sertés enterális patogén koronavírus, amely vizes hasmenést okozhat újszülött malacoknál, és jelentős gazdasági veszteségeket okozhat a sertésiparnak.Jelenleg nincs megfelelő szerológiai módszer a SADS-CoV fertőzés és a vakcina hatékonyságának értékelésére, ezért sürgősen szükség van egy hatékony enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA) alkalmazására a hiány pótlására.Itt egy SADS-CoV spike (S) fehérjét expresszáló rekombináns plazmidot állítottunk elő humán IgG Fc doménnel fuzionálva, hogy rekombináns bakulovírust termeljünk, és HEK 293F sejtekben expresszáljuk.Az S-Fc fehérjét protein G gyantával tisztítják, és megtartja reaktivitását anti-humán Fc és anti-SADS-CoV antitestekkel.Ezután az S-Fc fehérjét használtuk az indirekt ELISA (S-iELISA) kifejlesztésére és az S-iELISA reakciókörülményeinek optimalizálására.Ennek eredményeként 40 SADS-CoV negatív szérum OD450nm értékének elemzésével, amelyet immunfluoreszcencia vizsgálattal (IFA) és Western blottal igazoltunk, a küszöbértéket 0,3711-nek határoztuk meg.A 6 SADS-CoV pozitív szérum variációs koefficiense (CV) az S-iELISA-ban és azok között mind 10%-nál kisebb volt.A keresztreaktivitási teszt azt mutatta, hogy az S-iELISA-nak nincs keresztreaktivitása más sertésvírus-szérummal.Ezenkívül 111 klinikai szérumminta kimutatása alapján az IFA és az S-iELISA összesített koincidenciája 97,3% volt.A vírusneutralizációs teszt 7 különböző OD450nm szérum értékkel azt mutatta, hogy az S-iELISA-val kimutatott OD450nm érték pozitívan korrelált a vírusneutralizációs teszttel.Végül 300 sertéstelepi szérummintán S-iELISA-t végeztünk.Az egyéb sertés enterovírusok kereskedelmi készletei azt mutatták, hogy a SADS-CoV, a TGEV, a PDCoV és a PEDV IgG pozitív aránya 81,7%, 54% és 65,3% volt., 6%, ill.Az eredmények azt mutatják, hogy az S-iELISA specifikus, érzékeny és reprodukálható, és felhasználható a SADS-CoV fertőzés kimutatására a sertésiparban.Ez a cikk szerzői jogvédelem alatt áll.minden jog fenntartva.